聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒 NobleRyder D0912
北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒 NobleRyder D0912量大優(yōu)惠，咨詢(xún) ：
聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒 NobleRyder D0912
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聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
DNA回收試劑盒使用說(shuō)明書(shū)（PAGE回收）
試劑組成 | 20T | 50T |
溶膠液 | 5ml | 15ml |
結(jié)合液 | 20ml | 50ml |
漂洗液 | 15ml | 15ml |
洗脫液 | 1.5ml | 5ml |
研磨杵 | 20個(gè) | 50個(gè) |
過(guò)濾柱 | 20套 | 50套 |
吸附柱 | 20套 | 50套 |
本試劑盒采用可以高效、專(zhuān)一結(jié)合DNA的硅基質(zhì)材料和*的緩沖液系統(tǒng)，從聚丙烯酰胺凝膠上回收DNA片段，同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其它有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、文庫(kù)篩
選、連接和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)。配以特制的研磨杵和過(guò)濾柱，使你的操作更方便。
操作步驟：（所有離心步驟均可使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心）
*次使用前請(qǐng)先在15ml漂洗液中加入60ml無(wú)水乙醇。
1、將單一的目的DNA條帶從聚丙烯酰胺凝膠中切下（盡量切除多余部分），放入1.5ml離心管中，稱(chēng)取重量，用研磨杵將膠盡量擠壓碎。加入2倍體積的溶膠液吹打混勻（每100mg膠加入200ul溶膠液），75℃水浴30分鐘。
2、用1ml的去尖吸頭吸取混合物至過(guò)濾柱中（將膠一起吸入，溶液過(guò)多時(shí)可分次加入）。13,000rpm離心1分鐘。將收集管中的濾出液轉(zhuǎn)入新離心管。
3、取六倍體積結(jié)合液加入原離心管（每100mg膠加入600ul），清洗管壁后加入過(guò)濾柱中（溶液過(guò)多時(shí)可分次加入），顛倒過(guò)濾柱或輕輕吹打幾次混勻，13,000rpm離心1分鐘。將兩次收集的濾出液混合。
4、將總濾出液混勻后加入吸附柱中（溶液過(guò)多時(shí)可分次加入），13,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。
5、向吸附柱中加入600μl漂洗液（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），13,000rpm離心30-60秒，倒掉廢液，將吸附柱重新放入收集管中。
6、向吸附柱中加入600μl漂洗液，13,000rpm離心30-60秒，倒掉廢液。
7、將離心吸附柱放回收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液。將吸附柱開(kāi)蓋置于室溫3-5分鐘，*晾干，以防止殘留的漂洗液影響下一步的實(shí)驗(yàn)。
8、將吸附柱放到一個(gè)干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量65–70℃預(yù)熱的洗脫緩沖液（20-30μl），室溫放置2分鐘。13,000rpm離心2分鐘收集DNA溶液。
注意：①為了增加回收效率，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，13,000rpm再次離心1分鐘。
②洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于20μl，體積過(guò)小影響回收效率。
③洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5之間。
9、DNA回收產(chǎn)物直接下一步實(shí)驗(yàn)或者-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
1、電泳時(shí)使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。
2、切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì)DNA造成損傷。
3、本試劑盒對(duì)<50bpDNA片段回收效率偏低（30%左右），如想回收，應(yīng)加大結(jié)合液的體積，延長(zhǎng)吸附和洗脫的時(shí)間。
4、回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低。
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)，是一家專(zhuān)業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)、銷(xiāo)售、服務(wù)為一體的生物科技公司，公司主要經(jīng)營(yíng)的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等；產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器。
