血清蛋白電泳操作步驟及注意
更新時間：2014-04-21 點擊次數(shù)：5708次
在堿性環(huán)境里，血清蛋白皆帶陰電荷，在電場中向陽極泳動，因各蛋白質(zhì)等電點和分子量有差異，分子量小、陰電荷多泳動zui快;分子量大、陰電荷較少者泳動較慢。電泳后，從陽極開始，依次為白蛋白、a1球蛋白、a2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白五個區(qū)帶。
血清蛋白電泳操作步驟
?、?開機(jī)，啟動電泳儀。
?、?將1個(用于7 PROTEIN或用于15 RPOTEIN)或2個(用于30 PROTEIN)加樣梳置于平板上，有數(shù)字的一端向上，在2分鐘內(nèi)完成每塊加樣梳的加樣，每孔加10ul樣品，然后齒梳向上把加樣梳放于濕盒內(nèi)5分鐘。
?、?選擇相應(yīng)的電泳程序，使用HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)時選擇儀器的“PROTEIN 7”電泳程序，使用HYDRAGEL 15/30 PROTEIN(E)時選擇儀器的“PROTEIN 15/30”程序。 ㈣ 從包裝袋內(nèi)取出緩沖條，將其固定在電極支架背側(cè)的釘上，再取出凝膠，用薄濾紙快速輕輕地吸去凝膠表面多余的液體，在溫控板表面下1/3處加120 ?l[HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)]或200ul[HYDRAGEL 15 PROTEIN(E)]蒸餾水或去離子水，將凝膠片底邊緊靠框架底邊，邊緣對齊邊線，略彎曲凝膠片慢慢放平，注意凝膠片下面勿出現(xiàn)氣泡。
㈤ 自然放下支架，從濕盒中取出加樣梳并去除齒梳下的保護(hù)支架，7和15個樣品分析的加樣梳置于支架6號位，30個樣品分析的加樣梳則分別置于3號和9號位，注意點樣梳上的數(shù)字必須面對操作者，關(guān)上電泳艙蓋，按下鍵盤左側(cè)的綠色箭頭“START”鍵，電泳開始，確保儀器右側(cè)的空氣通道不被堵塞。
?、? 電泳儀自動發(fā)出蜂鳴聲,提示電泳結(jié)束，打開電泳蓋，將加樣梳和緩沖條丟棄，取出已烘干的膠片，用濕紙巾擦拭電極和溫控板，將膠片固定于凝膠支架上放入染色空間中，在檢查染色液瓶內(nèi)是否有300ml染色液，脫色液瓶內(nèi)是否有1000ml脫色液以及是否排空了廢液瓶后，選擇“PROT./B1-B2/Hb”染色程序并按“start”鍵開始染色。
?、? 在染色、脫色以及干燥步驟完成后，電泳儀自動發(fā)出蜂鳴聲，取出凝膠支架，將烘干的膠片用光密度儀進(jìn)行掃描，若希望膠片背景更加清晰，在進(jìn)行掃描前可以額外增加一個沖洗步驟，程序為“WASH ISOENZ/GEL”。 ㈧ 關(guān)機(jī)，在電腦系統(tǒng)上對掃描結(jié)果進(jìn)行分析。
血清蛋白電泳操作注意事項
?、鍨檫_(dá)到*檢測效果，同一試劑盒內(nèi)的所有組分必須一并使用。
㈡氨基黑染液的配制必須按照試劑盒內(nèi)使用說明配置，否則會降低蛋白片段的檢測效果。
?、缬帽V紙吸去凝膠表面多余液體時，接觸時間不能太長，應(yīng)快速移去，以免凝膠脫水。
?、枳⒁庀葤炀彌_條再放凝膠片，緩沖條取出時應(yīng)均勻擠捏使緩沖液能分布均勻。
